酶聯(lián)免疫試劑盒是酶免疫測定技術(shù)中應用較廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗,法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。
基本原理酶聯(lián)免疫試劑盒方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過酶聯(lián)免疫試劑盒檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來，使酶聯(lián)免疫試劑盒方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。
2．將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3．酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。
4．反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
6．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7．將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
8．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應，反應過程中，要經(jīng)常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應不要超過30分鐘）。
10．用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11．根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。
