柱式血液DNA提取試劑盒是基于離心柱/硅膠膜原理的、專門用于從新鮮或冷凍的動(dòng)物(包括人 和禽類)抗凝全血中提取基因組 DNA 的試劑。它具有下列特點(diǎn)：

1. DNA 純凈，OD260/280 在 1.8-2.0 之間。不含蛋白質(zhì)和 RNA 污染，可直 接用于 PCR、酶切、雜交等。

2. 產(chǎn)量高，一般為 1-10 ug/mL 全血(對哺乳動(dòng)物血液)。

3. 操作簡單，整個(gè)過程約 20 分鐘，全室溫操作，適合大規(guī)模樣品處理。

4. 用量廣泛， 每次可以處理少達(dá) 20 uL（對禽類動(dòng)物血液）， 多達(dá) 1 mL 的血 液(對哺乳動(dòng)物血液)。

5. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年?

1. 在 0.02-1 mL 新鮮或抗凝血液（冷凍血需先 37℃水浴融化）中加入 0.5 mL 紅細(xì)胞裂解液（A 型），吹打混勻。注意：溶液 A 非常容易長菌，取用需要在 無菌條件下進(jìn)行。

a) 哺乳動(dòng)物，血液使用量以 300 uL 以下為宜，使用量越大產(chǎn)量越高，但 產(chǎn)率會(huì)降低。如果血液多于 300 uL，重復(fù) 1-2 步兩次可以提高產(chǎn)率。

b) 禽類動(dòng)物，血液使用量以 20 uL 以下為宜，可以從第 3 步做起。

2. 室溫 12,000-15,000 rpm 離心 5 分鐘，沉淀呈粉紅色，小心傾去上清。

3. 再短暫離心半分鐘，吸棄殘留的液體。此步有利于后面的細(xì)胞裂解，但一般 可以省略。

4. 向有沉淀的離心管內(nèi)加入 0.5 mL 溶液 A（溶液 A 有少量晶體沉淀，用前需 要搖晃均勻），用移液槍吹打使沉淀充分懸浮起來。此步目的是裂解細(xì)胞，釋 放 DNA，所以吹打越充分越好。

5. 靜置 2 分鐘待溶液變清亮后，將液體轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中并靜置 2-5 分鐘， 以使 DNA 與膜充分結(jié)合。

6. 12,000 rpm 離心半分鐘，DNA 將吸附到膜上，棄收集管中的廢液。

7. 加入 0.7 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 離心半分鐘，棄收集管中的廢液。

8. 加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 離心半分鐘，棄收集管中的廢液。

9. 12,000 rpm 離心半分鐘，甩干殘留液體。此步很重要，以去除膜上殘留通 用洗柱液，否則會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)。

10.將離心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料離心管（自備）中，加入適量 30-100uL DNA 洗脫液 2.0，室溫放置 2 分鐘。如果將 DNA 洗脫液 2.0 在 65℃預(yù)熱后 再使用，洗脫 DNA 的效果會(huì)更好。

11. 12,000 rpm 離心半分鐘，離心管底溶液即 DNA 溶液?？梢粤⒓词褂没蚍?冰箱長期保存。?

柱式血液DNA提取試劑盒?